人結腸癌細胞株的細胞凍存的步驟：

　?。?）選擇處于對數生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。

　?。?）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養的細胞類型來選擇。

　?。?）將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細胞種類及代次、凍存支數）

　?。?）將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。

　?。?）人結腸癌細胞株的細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細胞復蘇培養，觀察生長情況，然后再繼續凍存。

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